金思德生物:实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用

金思德生物:实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用

  实时荧光定量PCR技术是DNA定量技术的一次飞跃。运用该项技术,我们可以对DNA、RNA样品进行定量和定性分析。定量分析包括绝对定量分析和相对定量分析。前者可以得到某个样本中基因的拷贝数和浓度;后者可以对不同方式处理的两个样本中的基因表达水平进行比较。除此之外我们还可以对PCR产物或样品进行定性分析:例如利用熔解曲线分析识别扩增产物和引物二聚体,以区分非特异扩增;利用特异性探针进行基因型分析及SNP检测等。目前实时荧光PCR技术已经被广泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域。其中最主要的应用集中在以下几个方面:

  DNA或RNA的绝对定量分析。包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。

  基因表达差异分析。例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA或差显结果的确证。

  基因分型。例如SNP检测,甲基化检测等。

  实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用:

  病原体检测:

  目前,采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、肝炎病毒、结核杆菌、细小病毒B19、EB病毒和人巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。

  遗传及优生优育诊断:

  到目前为止,人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗,只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性疾病的发生,如为减少X连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。例外还可以通过实时荧光定量PCR对孕妇弓形虫,梅毒等检测,这对找出不明原因流产和习惯性流产的病因提供有力的帮助,大大提高优生优育。

  指导治疗:

  对病原体定量分析显示:病原体量与某些药物的疗效关系。如HCV高水平表达,干扰素治疗作用不敏感,而HCV低滴度,干扰素作用敏感;在拉米夫定治疗过程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,随后若再度上升或超出以前水平,则提示病毒发生变异等。

  肿瘤基因检测:

  尽管肿瘤发病的机理尚未清楚,但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。p53癌基因的表达增加和突变,在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变,而且可以准确检测癌基因的表达量。随着与肿瘤相关的新基因的不断发现,荧光定量PCR技术将会在肿瘤的研究中发挥更大的作用。

  免疫方面检测:

  通过荧光定量PCR检测出B27,HLA等来帮助诊断免疫性疾病,如强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、器官移植排异反应等。

金思德生物:实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用

  天津金思德生物技术有限公司率先研发出了利用物理方法达到热启动效果的PCR仪—E-1000,这是目前世界上唯一一款热启动PCR仪,并申报了国家知识产权发明专利。

  传统PCR反应中,反应体系各成分均是一次加入并进入循环,在反应温度由室温(25℃)上升至高温(94~95℃)过程中,可能发生引物错配和二聚体的形成,继而导致非特异性产物的扩增。业内最普遍的减少非特异性产物的方法是在PCR反应体系中加入热启动酶,从而达到优化目的产物扩增的目的。这种加入热启动酶的方法虽然实现了优化PCR反应的作用,但成本高,不利于整体试验经费的管理和使用。

  根据市场上现在出现的这种问题,我公司应市场需要研发了利用物理方法使PCR仪从物理角度来抑制非特异性产物的扩增,大大减少了试验成本,为下游试验提供了更大的发挥空间。

  天津金思德生物技术有限公司是以研发、生产为主体的高新技术器企业。致力于生命科学最热门的基因工程领域,自主品牌PCR基因扩增仪系列、测序仪系类及相关分子生物试剂的研发、生产和经营。

  天津金思德生物技术有限公司

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