金思德生物:Chelex-100法提取血样中DNA

金思德生物:Chelex-100法提取血样中DNA

  金思德生物:Chelex-100法提取血样中DNA方法如下:

  (1)在0.5ml离心管中加入500ul灭菌蒸馏水,再加入5ul抗凝血(40ul全血+20ul3.8%柠檬酸钠抗凝剂)或0.25cm2血斑,小心混匀,室温下放置30min,间歇振荡(陈旧血斑需剪碎)。

  (2)13000rpm离心3min,小心移去上清液。若样品为血斑,保留载体。用灭菌水洗净白细胞沉淀物,直至无色或血色素很少。

  (3)加入200ul 5% Chelex-100溶液,56℃保温35min(若样品为陈旧血斑,则加3ul 10mg/ml蛋白酶K)。

  (4)剧烈振荡5-10sec,100℃加热8min。

  (5)剧烈振荡5-10sec,13000rpm离心3min,上清液用于PCR扩增反应,4℃保存备用。

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