PCR产物纯化试剂盒

PCR产物纯化试剂盒

  【产品名称】PCR 产物纯化试剂盒(磁珠法)

  【产品编号】A3

  【储存保存】 磁珠置于 2-8℃保存,其它组分常温(15-25℃)保存

  【使用范围】适用于从 PCR 反应产物及其它酶促反应物中,提取纯化高质量 DNA,适用于手动、半自动、全自动化核酸提取纯化平台。

  【作用原理】在一定的缓冲液体系中磁珠吸附 DNA,借助外加磁场作用与溶液中盐离子、引物等杂质分离,经过洗涤除杂,在一定的洗脱液缓冲体系中将 DNA 重新释放

  到溶液中,达到快速分离纯化高质量 DNA 。

  【注意事项】

  1.磁珠溶液使用前需充分震荡混匀。

  2.使用前应先检查溶液 A 是否浑浊,如有浑浊现象,可在 37℃烘箱或水浴加热几

  分钟,混匀至沉淀完全溶解。

  3.请勿将磁珠溶液冷冻、离心、干燥。

  【产品组成】

试剂盒组成 数量(100T) 数量(200T)
溶液A 7.5mlx1瓶 15mlx1瓶
磁珠溶液 0.6mlx1瓶 1.2mlx1瓶
洗脱液 7.5mlx1瓶 15mlx1瓶

  【操作步骤】 (以 50ul PCR 产物为例)

  1. 取 50µlPCR 、酶切或酶标反应液加到相应的(例如 1.5ml)离心管中,加入 50µl 的溶液 A,6µl 磁珠( 用前 震荡 混匀磁珠溶液),涡旋震荡 10 秒钟;室温放置 5min( 期间 震匀 荡混匀 2-3  次)。

  注:如果没有相应的 震荡器,可以用移液器 吹打置 混匀后,室温放置 5min ,放置过程中,抽匀 打混匀 2-3  次。

  2. 将离心管置于磁力架上静置 30s,吸弃上清液。

  注:勿将磁珠吸出;吸弃液体时,勿将反应管/ 反应板从磁力架上取下,务必吸净离心

  管内残留的液体。

  3. 向离心管中加入 200µl 的 85%乙醇,室温下放置 30s,倒弃管内的液体;尽可能吸弃上清液(置 吸弃上清后可放置 1min ,再除去残留液体);

  注:勿将磁珠吸出;此步骤中 勿将反应管/ 反应板从磁力架上取下;务必吸净离心管内残留的液体。

  4. 重复上述步骤 3。

  5. 离心管开盖放置在磁力架上,尽量除尽上清( 吸弃上清后可放置 1-2min ,再除去残留液体 ),让磁珠在室温下干燥 5~10 min。

  注:乙醇残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR  等)实验。但要避免过分干燥磁珠,

  以免难以洗脱核酸。 。

  6. 移去磁力架,向离心管中加入 20-50 µl 洗脱液,用移液器抽打或涡旋震荡混匀磁珠溶液,室温放置 5min( 期间轻点混匀磁珠溶液 2-3  次)。

  7. 将离心管置于磁力架上,静置 30s,小心吸取上清液至干净的离心管中,即得较高纯度的 DNA,直接用于下游实验或-20℃保存。

  注意:在操作中如发现管壁或管盖上有液体可以短时离心将其甩至管底。 洗脱液的体积不于 应少于 20 μl, 体积过少会影响回收的效率 。洗脱液的 PH  值对洗脱效率有很大影响,若用ddH2O  做洗脱液,应保证其 PH  值在 7.0-8.5  范围内,PH  值低于 7.0  会降低洗脱效率。且 DNA产物应保存在-20 ℃,以防 DNA  降解。

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